Cultivo de células de cartílago nasal humano / Culure of human nasal cartilage cells

La producción de cartílago in vitro por bioingeniería de tejidos tienen un enorme potencial terapéutico. Sin embargo, en Venezuela aún no se ha desarrollado esta tecnología, por tanto en nuestro laboratorio se están desarrollando proyectos dirigidos a conocer aspectos involucrados en la biología de los condrocitos, así como también de los tipos de matrices a utilizar como sustrato para su cultivo. En este trabajo se aislaron condrocitos de cartílago nasal humano obtenidos de cirugías estéticas. Las células cultivadas sobre plástico a altas densidades crecen en monocapa, mostrando una morfología poliédrica característica hasta el segundo pasaje; en subcultivos sucesivos estas células muestran cambios morfológicos observándose células fusiformes, indicando un proceso de desdiferenciación. Cuando las células son incluidas en una matriz de colágeno tipo I la mayoría mantiene su morfología esférica típica y sintetizan componentes de matriz característicos como proteoglicanos y colágeno tipo II, marcadores de estabilidad fenotípica, factor importante para el desarrollo de neotejidos

The in vitro production of cartilage bu tissue bioengineered has an enormous therapeutic potential. However, this technology has not been developed in Venezuela, so, in our laboratory several projects related to biological aspects of chondrocytes and the best matrixial support for their culture are under study. In this work we have isolated chondrocytes from human nasal samples obtained from plastic surgery and culture of cells on plastic dishes at high densities. Initially the cells grew up as a monolayer of poliedric cells, and after the second passage this shape was modified, in successive subcultures there cells show spindle cell morphological changes observed, indicating a dedifferentiation process. When cells are embedded in a matrix of collagen type I most keep their spherical morphology typical characteristic matrix components synthesized as proteoglycans and collagen type II markers, phenotypic stability, an important factor for the development of new tissues

Human hepatoma cell line (Hep G2) cellular response to hypothermic stress with recovery: Induction of Hsp70, Hsp60 and Hsf1 expression / Respuesta celular de línea de hepatoma humano (HepG2) al estrés hipotérmico con recuperación: Inducción de la expresión de Hsp60, Hsp70, y Hsf1

The cell response of human HepG2 cells exposed to hypothermia with rewarming was analyzed. Ultrastructural findings in hypothermic stressed cells showed swollen mitochondria, dispersed chromatin, vacuoles and ring-shape nucleolar reorganization. These changes were coupled with significative differences in the induction of Hsp60, inducible Hsp70 and monomeric Hsf1 in all treated samples, but not in Hsc 70 expression. Cellular response to hypothermia could be associated with the synergistic induction of Hsp expression.

En este trabajo se analizó la respuesta celular de células HepG2 expuestas a hipotermia con posterior recuperación. Los hallazgos ultraestructurales en células sometidas a estrés hipotérmico incluyeron mitocondrias edematizadas, núcleos picnóticos, vacuolas y reorganización nucleolar en forma de anillo. Tales cambios están relacionados con diferencias significativas en la inducción de la expresión de Hsp60, Hsp70 inducible y Hsf 1 monomérico en todas las muestras tratadas, pero no de Hsc70. La respuesta celular a la hipotermia puede ser relacionada con la inducción sinergística de las Hsp.

Caracterización morfológica y bioquímica de condrocitos in vitro / Characterization morphologic and biochemistry of chondrocytes in vitro

Actualmente los cultivos de condrocitos tienen una amplia aplicación clínica en el tratamiento de patologías del cartílago articular, así como también en la reconstrucción de cartílago auricular y nasal, utilizando sustratos naturales o sinéticos. En vista de la importancia de este tipo de cultivo, el siguiente trabajo tuvo como finalidad estandarizar la metodología para el establecimiento de los cultivos de condrocitos humanos y de pollo, evaluando el crecimiento de estas células en cultivos en monocapa y en matrices tridimensionales de colágeno tipo I, mediante técnicas histoquímicas, inmunohistoquímicas y bioquímicas. Los condrocitos humanos y de pollo cultivados sobre plástico a altas densidades mostraron un crecimiento en monocapa, destacándose una apariencia celular de tipo poliédrica con espacios prominentes entre ellas, donde se detectó la presencia de glicosaminoglicanos (GAG) componentes de la matriz extracelular, pero la producción de PG es baja y la mayor parte de éstos difunden al medio de cultivo debido a la falta de una matriz que los retenga. En cambio, en presencia de una matriz de colágeno tipo I, se le brinda a los condrocitos humanos y de pollo un espacio tridimensional que simula las condiciones en las que se encuentran in vivo, por lo cual los condrocitos mantienen su morfología esférica y sintetizan componentes de matriz característico, como son GAG sulfatados y colágeno tipo II, que son marcadores de la estabilidad fenotípica de estas células

Biomodulación farmacológica en cáncer / Pharmacologic biomodulation in cancer

El descubrimiento de la P-glicoproteina (Pgp) como mediador del fenotipo multidroga resistencia (MDR), representa uno de los más importantes hallazgos de investigación en la farmacología antineoplásica de la última década. La presencia de la Pgp tanto en tejido epitelial, como en tumores tratados y no tratados con quimioterapia, más la identificación de agentes con capacidad de revertir el fenotipo MDR in vitro, ha generado gran entusiasmo para su estudio y posible utilización en clínica. Esta revisión presenta los más recientes adelantos logrados por medio de las investigaciones experimentales y clínicas de los agentes con capacidad de revertir la resistencia en cáncer.

Resistencia multidroga (MDR) o pleiotropica / Multidrug or pleiotropic resistance

La resistencia que se genera a los agentes citotóxicos, es uno de los mayores obstáculos que se presenta en el tratamiento del cáncer, existiendo diversar causas para los fracasos terapúuticos, sidneo la principal una resistencia intrínseca de la célula tumoral. Así se ha determinado la presencia de una glicoproteina, en la membrana de las células tumorales, la P-glicoproteina de 170 Kd, que las conduce a ser resistentes a las drogas citotóxicas; tal hallazgo ha permitido describir un fenótipo de células multiresistentes (multidroga resistente o MDR) también llamada resistencia pleiotrópica. La P-glicoproteina, codificada por el gen mdr1 en el humano, actúa activamente expulsando las drogas citotóxicas fuera de las células, por lo cual su responsabilidad en la resistencia clínica puede pensarse en razón de su expresión frecuentemente elevada en cánceres resistentes intrínsecos o inducidos por la quimioterapia. En esta revisián se analizan los hallazgos más recientes en esta área, sugieriendose que tanto la actividad de la "bomba" P-glicoproteina como su regulación genética, podrían, potencialmente suminsitrar nuevos enfoques y medios para la terapéutica antineoplásica.

Cultivo de queratinocitos humanos in vitro / In vitro human keratinocytes cultured

La técnica de cultivo de queratinocitos puede considerarse como un arma irreemplazable y una alternativa confiable para ser aplicada a pacientes con daño parcial o externo de su piel que ameriten sus propias células especializadas para su recuperación. El objetivo de este estudio fue desarrollar una metodología propia para obtener monocapas de epidermis, para lo cual se obtuvieron muestras de piel procedentes de 7 pacientes sometidos a diferentes procedimientos de cirugía estética. Mediante la dispasa tipo II (2,4 unid/ml) se logró una excelente separación de la epidermis de la dermis al obtener una lámina de epidermis libre de fibroblastos, evidenciado además en los cultivos primarios de las células epidermales, donde se observó el crecimiento celular de los queratinocitos libres de células dérmicas, cuando se cultivaron en el substrato de colágeno tipo I obtenido partir de cola de la rata. En los subcultivos se hizo una comparación de diferentes subtratos-plásticos, fibroblastos inhibidos con mitomicina C (4 Mg/ml), substratos de colágeno y se observó un comportamiento similar de agregación y formación de monocapas entre 8-14 días de cultivo, a excepción de los queratinocitos subcultivos sobre plástico donde las células degeneraron en un tiempo corto. También se analizaron subcultivos en presencia de geles de colágeno tipo I con medios condicionados y se apreció una mayor velocidad de crecimiento en los queratinocitos al igual que cuando se utilizaron fibroblastos inactivados. La obtención de monocapas de células epidermicas se logró entre los 27 y 35 dias después de haberse iniciado el cultivo, mediante hormona de crecimiento a una concentración de 2 Mg/ml; se demostró diferenciación y estratificación de las monocapas de queratinocitos obtenidas in vitro